在有关转染的研究中，为了感染原代细胞和难感染的细胞系，研究者借助于病毒载体实现。由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。而在RNAi研究需要长期观察或者需要进行动物实验时，基于慢病毒构建的shRNA的优势更为明显。 我们能够为您提供包括RNAi靶序列设计、慢病毒载体构建、测序、慢病毒生产等一站式服务。
◇ 服务内容和流程：
1）根据目的基因相关信息（序列，序列号等），对每条目的设计3条siRNA序列，其中一条序列为阴性对照组；
2）根据设计好的 siRNA序列，设计，合成两条互补的短片段的DNA；
3）对合成好的 DNA片段进行稀释，退火，连接到线形化处理过的载体，转化，涂平板，过夜培养；
4）通过 PCR的方法筛选阳性菌落，进行测序，分析测序结果；
5）对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒；
6）利用构建好的质粒做转染实验， 48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因，筛选出一条最有效的siRNA序列；
7）筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；
8）浓缩、纯化病毒液，测定滴度。
◇ 您只需提供：
靶基因信息。
◇ 我们提供：
慢病毒包装的实验报告单，含实验材料方法和结果，
提供108TU/ml病毒（1ml）和对照病毒。
◇ 实验周期：6-7周。
◇ 收费标准：询价。 |
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